PCR을 이용한 치아우식증 및 치주염 연관 병원체의 빠른 검출
Rapid Detection of Pathogens Associated with Dental Caries and Periodontitis by PCR Using a Modified DNA Extraction Method
김재환, 김미아, 이대우, 백병주, 양연미, 김재곤,
소속 상세정보
김재환 ( Kim Jae-Hwan ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
김미아 ( Kim Mi-Ah ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
이대우 ( Lee Daw-Woo ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
백병주 ( Baik Byeong-Ju ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
양연미 ( Yang Yeon-Mi ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
김재곤 ( Kim Jae-Gon ) - 전북대학교 치의학전문대학원 소아치과학교실
KMID : 0358920140410040292
Abstract
구강 병원체의 검출 방법은 여러 가지가 있지만 그 중 PCR을 이용한 검출이 확실하고 빠른 방법으로 알려져 있다. PCR을 위한 많은 DNA 추출법이 사용되고 있으나 상업적인 DNA 추출 kit들은 일반적으로 가격이 비싸고 절차가 여러 단계로 되어있으며, 그 외의 방법은 페놀과 클로로포름과 같은 유해한 화학물질을 써야하는 등의 단점이 있다. 이 연구에서 NaOH 용액을 이용한 개선된 DNA 추출 방법은 치아우식증, 치주염과 관련된 병원체를 빠르고 간단하며 비용-효율적으로 검출하였다. 세균으로부터 DNA를 추출하기 위한 boiling은 기존의 10분이 아닌 1분으로 충분하였고 4℃에서 최소 13개월 이상 DNA의 보관이 가능하였으며 sonication 유무에 따른 차이는 없었다. 따라서, 이 방법은 상업적인 kit나 유해한 화학물질을 쓰지 않고서도 타액 표본으로부터 직접적으로 빠른 시간 내에 DNA를 추출하여 병원체의 유무 결과를 확인하는데 매우 적합할 것으로 생각한다.
DNA extraction is a prerequisite for the identification of pathogens in clinical samples. Commercial DNA extraction kits generally involve time-consuming and laborious multi-step procedures. In the present study, our modified DNA isolation method for saliva samples allows for the quick detection of pathogens associated with dental caries or periodontitis by PCR within 1 h. To release DNA from the bacteria, 1 min of boiling was adequate, and the resulting isolated DNA can be used many times and is suitable for long term storage of at least 13 months at 4℃, and even longer at -20℃. In conclusion, our modified DNA extraction method is simple, rapid, and cost-effective, and suitable for preparing DNA from clinical samples for PCR for the rapid detection of oral pathogens from saliva.
키워드
DNA 추출; 구강 병원균; 타액; 중합효소연쇄반응
DNA extraction; Oral pathogens; Saliva; Polymerase chain reaction(PCR)
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